Fluoreszentzia mikroskopia: metodoaren printzipioak

Absorption eta berriro emisioa gehiago organikoak eta organikoak fluidoak argi fosforazko edo fluoreszentzia emaitza da. fenomeno arteko aldea absortzio eta emisio fluxua argi arteko tartearen iraupena da. Noiz prozesu horietako fluoreszentzia gertatzeko ia aldi berean, fosforeszentzia bitartean - atzerapen batzuk.

informazio historikoa

1852 urtean, British zientzialari Stokes, lehen deskribatu fluoreszentzia. epe berri bat sartu zuen esperimentu baten ondorioz fluorspar, igortzen argi gorria argi ultramore azpian. Stokes fenomeno interesgarri bat adierazi. Da aurkitu erradiazio fluoreszente uhin dela beti kitzikapen argia fluxua baino handiagoa.

19an mendean hipotesia berresteko han esperimentu asko izan dira. Laginak hainbat hori argi ultramorearen eraginpean fluoresce erakutsi dute. Material hauen artean, besteak beste, kristalak dira, erretxinak, mineralak, klorofila, gordin drogak, konposatu organikoak, bitaminak, olio artean. probak biologikoa tindagai erabilera zuzenaren hasi zen bakarrik 1930

Fluoreszentzia mikroskopia: azalpena

20an mendean ikasketak lehen erdian erabilitako material batzuk zehaztasun handiaren ikusgai. стал важнейшим инструментом и в биомедицинских, и в биологических исследованиях. errendimendua, eta ezin da metodo kontrastatu, lor esker, fluoreszentzia mikroskopiaren metodoa ikerketa biomedikoa eta biologikoak ezinbesteko tresna bihurtu da. Era berean, emaitza garrantzitsuak lortu ziren, eta material da.

? Zer abantaila fluoreszentzia mikroskopiaren metodoa ez? material berriak erabiliz posible bihurtu eta zelula oso zehatzak submicroscopic osagaien aukeraketa. Fluoreszentzia mikroskopia molekula bakar atzeman dezake. Tindagai hainbat baimendu Hainbat elementu identifikazioa aldi berean. the difrakzioa ekipamendua da, eta horrek, aldi berean, laginaren propietate zehatzak araberakoa muga of mugatua bereizmen espaziala arren, maila honen azpitik molekula identifikazioa ere nahiko posible da. Hainbat lagin irradiazio erakusketa autofluorescence ondoren. Fenomeno hori oso zabaldua petrologia, botanika, erdieroaleen industrian erabiltzen da.

Ezaugarriak

Estudio animalia ehunak edo patogeno askotan konplikatua edo ahulegia edo oso indartsu -hau autofluorescence. Hala ere, ikasketak balioa sarrera material osagaiak uhin jakin batean ilusioa sartu eta beharrezko argi fluxua intentsitate igorle hartzen du. Fluorochromes independentean gai tindagai egiturak (ikusgai edo ikusezin) erantsita gisa jarduteko. Horrela helburuaren selektibitatea altua da, eta etekin kuantikoaren dute.

стала широко применяться с появлением естественных и синтетических красителей. Fluoreszentzia mikroskopia izan da oso tindagai natural eta sintetikoa etorrerak geroztik erabiltzen da. zenbait intentsitate emisioa eta kitzikapen profilak jabetu ziren eta helburuak biologiko partida norakoak.

Molekula banakako identifikazioa

Askotan, baldintza egokiak ere, bereizi elementu dirdira bat erregistratu ahal izango duzu. Horretarako, besteak beste, beharrezkoa da detektagailu eta optikoa atzeko zarata nahikoa baxua emateko. Fluorescein porrota molekula ondorioz photobleaching 300 mila. Arte Fotoiak igor dezake. % 20 bilketa prozesuaren eraginkortasuna eta horiek erregistratu ahal 60 mila inguru kopuru bat.

, основанная на лавинных фотодиодах или электронном умножении, позволяла исследователям наблюдать поведение отдельных молекул на протяжении секунд, а в ряде случаев и минут. Fluoreszentzia mikroskopia oinarritutako photodiodes mendizale edo biderkatzea elektronikoetan, onartzen ikertzaileek molekula indibidualen portaera behatzeko bigarren bitartez, eta, kasu batzuetan, nahiz eta minutu.

konplexutasun

zarata optiko hondo errepresioa alde funtsezko gai bat. Izan ere, iragazkiak eta lenteak erakusteko autofluorescence batzuen diseinuan erabilitako materialak askok, Hastapenak zientzialari ahaleginari osagaiak fluoreszentzia altua edukitzea ekoizpena orientatuta ziren ondorioz. Hala ere, ondorengo esperimentuak dute ondorio berriak ekarri. , основанная на полном внутреннем отражении, позволяет достичь низкого фона и высокоинтенсивного возбуждающего светового потока. Bereziki, aurkitu zen fluoreszentzia mikroskopiaren, oinarritutako barne hausnarketa guztira on hori, atzealdean baxua eta intentsitate handiko kitzikapen argia lortzeko aukera ematen du.

mekanismo

, основанной на полном внутреннем отражении, заключаются в использовании быстрозатухающей или нераспространяющейся волны. fluoreszentzia mikroskopiaren printzipioak, oinarritzen barne hausnarketa guztira on evanescent uhin edo evanescent erabilera da. gertatzen media arteko muga desberdinekin zuen errefrakzio indizeak. Kasu honetan, argi laburrak prisma igarotzen. handiko errefrakzio parametro bat du.

prisma aqueous irtenbide edo beira parametro txikiko ondoan. argia da zuzenduta angelu bat dela gehiago kritikoa at izpi bat bada, habe guztiz interfazetik islatzen da. Fenomeno hau, aldi berean, nonpropagating olatuak eragiten. Bestela esanda, sortutako elektromagnetikoak eremuan bertan txikiagoa errefrakzio parametro Distantzia 200 baino gutxiago nanometro dituzten euskarri sartzen.

The evanescent uhin argi intentsitatea nahikoa fluorophores urduritu litzateke. Hala ere, bere sakonera oso txikia, bere bolumena oso txikia izango da. Emaitza behe-mailako hondo bat da.

aldatzea

Fluoreszentzia mikroskopia barne hausnarketa guztira oinarrituta dago, egon epi-argiztapen inplementatu daiteke. Hau numerikoak irekiera handiko lenteak eskatzen (gutxienez 1,4, baina desiragarria 1.45-1.6 iritsi dela da), eta partzialki argituta eremu aparatu. Bigarrenak a Leku tamaina txikiekin lortzen da. uniformetasuna handiagoa mehe eraztuna da, hau da korrontearen zati bat blokeatu erabiliz. angelu kritikoa, horren ondoren, han guztira isla da, murgiltze lenteen ertain eta estaldura mikroskopioaren beiraren errefrakzio-maila handia behar dugu.